微小核糖核酸(miRNA)是一類短鏈非編碼RNA，在基因調(diào)控中發(fā)揮一系列關鍵作用。2024年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎授予美國科學家Victor Ambros和Gary Ruvkun，以表彰他們發(fā)現(xiàn)了miRNA及其在轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控中的作用。研究表明，異常的miRNA表達往往是由多種癌癥類型的基因畸變引起的，并通過靶基因表達的失調(diào)在癌癥的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用。因此，許多miRNA與腫瘤的發(fā)病機制密切相關，包括細胞增殖、侵襲等。miRNA診斷模型的建立有助于早期檢測多種高風險的癌前病變。
 

　　近期，蘇州醫(yī)工所繆鵬課題組通過環(huán)張力促進的疊氮-炔環(huán)加成反應(SPAAC)輔助三維DNA納米結構的調(diào)控，并進一步開發(fā)了新型的miRNA檢測方法(圖1)。首先設計了5條單鏈DNA用于組裝DNA截錐體納米結構。通過序列末端巰基修飾可將其底部牢固地結合在金電極表面；其頂端序列與目標miRNA序列結合并被雙鏈特異性核酸酶(DSN)降解，進而激活該納米結構的三條側(cè)鏈與P1進行SPAAC反應。SPAAC是一種無金屬無酶輔助的疊氮化物和環(huán)辛基類炔烴之間的點擊反應，具有高選擇性和生物正交特性，因此非常適合在DNA納米結構的離散位點上進行連接反應。生成的三條長單鏈自發(fā)折疊為莖環(huán)結構，縮短了P1末端修飾的二茂鐵與電極之間的距離，有效提升了電化學響應(圖2)。該傳感器利用三維DNA納米結構進行目標序列的高效分子識別，進一步利用酶促反應與SPAAC點擊化學反應調(diào)控DNA納米結構，實現(xiàn)電化學信號放大。該傳感器具有極高的靈敏度，此外在生物樣本測試中表現(xiàn)出高度的特異性和穩(wěn)定性(圖3)，具有廣闊的應用前景。
 

圖1 SPAAC輔助DNA納米結構轉(zhuǎn)換及DSN酶促信號放大示意圖
 

圖2 電極修飾的電化學表征及莖環(huán)結構信號增強效應
 

圖3 基于三維DNA納米結構轉(zhuǎn)換及點擊化學的miRNA電化學傳感器性能結果
 

　　相關結果已發(fā)表在Nano Letters上(中國科學院一區(qū))。論文第一作者為碩士研究生王婷婷，通訊作者為繆鵬研究員。該工作得到了國家自然科學基金(82272119)的資助。